لیص یک آنزیم پیرووات کیناز نوترکیب و بررسی برخی خصوصیات بیوشیمیایی آن
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه الزهراء - دانشکده علوم پایه
- نویسنده سیده مهسان بنی جمالی
- استاد راهنما سامان حسینخانی
- تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
- سال انتشار 1389
چکیده
پیرووات کیناز آنزیمی کلیدی در مسیر گلیکولیز است که انتقال یک گروه فسفر از فسفو انول پیرووات به adp را کاتالیز نموده و منجربه تولید پیرووات و atp می شود. با توجه به اهمیت بالای این آنزیم در اکثر موجودات زنده، و استفاده روزافزون از آن در زمینه های گوناگون، مراحل تخلیص این آنزیم، به منظور آشنایی بیشتر با خصوصیات نوعی پیرووات کیناز متعلق به یک geobacillus بومی ایران، که قبلا در وکتور pet-28a کلون شده بود، انجام شد. پس از آن برای شناسایی نقاط انعطاف پذیر و در دسترس این آنزیم از تکنیک پروتئولیز محدود در حضور دو پروتئاز تریپسین و ترمولیزین استفاده شد. با توجه به ویژگی های سوبسترایی متفاوت این پروتئازها و قابلیت فعالیت آنها در دماهای متفاوت، اطلاعات مفیدی در رابطه با دمین های ساختاری پیرووات کیناز مورد مطالعه به دست آمد. سپس تاثیر گلایسین، سوکروز و mg2+ به طور جداگانه بر الگوی پروتئولیز در دمای ?c60 بررسی شد. مطالعات طیف جذبی آنزیم پیرووات کیناز در حضور این افزودنی ها تغییر در شکل فضایی پیرووات کیناز را نشان داد. سرعت پروتئولیز در حضور افزودنی ها کاهش یافت اما نقاط مستعد جدیدی در معرض قرار نگرفت و نقاط قبلی نیز همچنان نسبت به پروتئولیز حساس بودند. نتایج این مطالعات به تفسیر و شناسایی قطعات حاصل از پروتئولیز کمک نمود. فعالیت آنزیمی پیرووات کیناز نیز در تمام مراحل به صورت سنجش همراه با آنزیم لوسیفراز محاسبه شد. در نهایت به منظور تعیین خصوصیات دقیق و نیز نقاط مستعد پروتئولیز، جداسازی قطعات حاصل از پروتئولیز محدود به کمک روش الکتروفورز preparative انجام شد.
منابع مشابه
خالص‌سازی آنزیم لاکاز قارچ Trametes و تعیین خصوصیات فیزیکوشیمیایی لاکاز نوترکیب: یک مطالعه آزمایشگاهی
Background and Objectives: Laccase is the most abundant member of protein family that catalyzes the oxidation of substituted phenols. Laccases are used as biocatalysts for decolorization and bleaching in dye industries, detoxification in environment, and juice clarification in food industries. The present study aimed at producing recombinant laccase, purifying with high yield and fold, and char...
متن کاملتأثیر سطوح مختلف روی جیره بر فعالیت آنزیم پیرووات کیناز و الگوی الکتروفورتیک عضله در بچه ماهی سفید دریای خزر (Rutilus frisii Nordmann, 1840)
در یک آزمایش تغذیهای، تأثیر 2 جیره غذایی حاوی دو سطح از فلز روی (50 و 200 میلیگرم بر کیلوگرم غذا) و جیره شاهد (فاقد روی) بر نرخ فعالیت آنزیم پیروواتکیناز و الگوی الکتروفورتیک عضله در ماهی سفید دریای خزر (Rutilus frisii) بررسی گردید. بدین منظور 270 عدد ماهی با میانگین (± انحراف معیار) وزن 06/0± 56/0 گرم در 9 آکواریوم 50 لیتری به‌طور تصادفی توزیع گردیده و به مدت سه ماه 3 بار در روز تغذیه شد...
متن کاملمقایسۀ برخی از خصوصیات کینتیکی و بیوشیمیایی آنزیم تریپسین ماهی کیلکای معمولی (Clupeonella cultriventris caspia) با تریپسین تجاری (Porcine)
در این تحقیق برخی از خصوصیات کینتیکی و بیوشیمیایی آنزیم تریپسین کیلکای معمولی با تریپسین تجاری Porcine بررسی شد. نتایج نشان داد که دما و pH بهینه برای فعالیت آنزیم تریپسین کیلکای معمولی و تجاری حاصل از خوک (Porcine) به ترتیب 60 و 8 درجۀ سانتی‌گراد بود. پایداری دمایی و pH فعالیت آنزیم تریپسین در کیلکای معمولی به ترتیب 45 درجۀ سانتی‌گراد و 7-10 و خوک 50 درجۀ سانتی‌گراد و 4-11 بود. یون‌های فلزی Ca...
متن کاملکلون سازی و بیان ژن رمزکننده آنزیم لاکاز قارچ Trametes در میزبان مخمری و تعیین خصوصیات کینتیکی و بیوشیمیایی آنزیم
لاکاز متعلق به خانواده پلی فنول اکسیداز است و به دلیل خواص ساختاری و عملکردی در حذف آلودگیهای زیست محیطی اهمیت بسیار زیادی دارد. اخیرا قابلیت اکسیداسیون مواد فنلی و غیر فنلی لاکاز مورد توجه بسیاری از محققان قرار گرفته است. هدف از این پژوهش، تولید لاکاز نوترکیب و تعیین خصوصیات بیوشیمایی و کینتیکی آنزیم است. از آنجائیکه قارچ Trametes قابلیت تولید مقدار اندک لاکاز را دارد، جهت تولید انبو...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه الزهراء - دانشکده علوم پایه
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023